Transplantation of human immature dental pulp stem cell in dogs with chronic spinal cord injury

Abstract Purpose: To investigate the therapeutic potential of human immature dental pulp stem cells in the treatment of chronic spinal cord injury in dogs. Methods: Three dogs of different breeds with chronic SCI were presented as animal clinical cases. Human immature dental pulp stem cells were injected at three points into the spinal cord, and the animals were evaluated by limb function and magnetic resonance imaging (MRI) pre and post-operative. Results: There was significant improvement from the limb function evaluated by Olby Scale, though it was not supported by the imaging data provided by MRI and clinical sign and evaluation. Conclusion: Human dental pulp stem cell therapy presents promising clinical results in dogs with chronic spinal cord injuries, if used in association with physical therapy.

Macroscopic and microscopic analysis of 2 embryos and 1 foetus derived from a sheep (Ovis aries) without breed / Análise macroscópica e microscópica de 2 embriões e 1 feto derivados de ovelha (Ovis aries) sem raça

The interest in embryology, the science of the development of a zygote into a completely developed foetus, has increased greatly in recent years due to a number of studies involving embryonic and induced pluripotent stem cells. In addition, the development of techniques such as cloning has aided to understand the critical events that occur during embryonic development. In this study, we describe the morphology of two sheep embryos and one foetus using macroscopic and microscopic techniques. We investigated sheep without defined breed on days 24, 32, and 50 of gestation (estimated by crown-rump length [CR]). Macroscopically, we observed the development of E1 (24 days), with visible optic vesicle, but without retinal pigmentation and the forelimbs bud in development. In the E2 (32 days), we noticed the presence of optic retinal pigmentation and forelimbs more developed in comparison with E1. As expected, F1 revealed an eyeball already covered and the forelimbs developed. Meanwhile, microscopic analysis revealed somite, ventricle, atrium, and oral cavity in development in E1. However, in F1 we were able to identify more complex structures, such as ossification in the spine, ventricle, atrium, intraventricular septum, pericardial sac, and oral cavity with tongue. This work brings more precise and detailed data on the morphological characteristics of the major organ systems (nervous, circulatory, respiratory, digestive, and urinary) at each embryonic and foetal stage analysed.(AU)

O interesse em Embriologia, a ciência do desenvolvimento de um zigoto em um feto completamente desenvolvido, tem aumentado consideravelmente nos últimos anos devido a uma série de estudos envolvendo células-tronco pluripotentes embrionárias e induzidas. Além disso, o desenvolvimento de técnicas como a clonagem tem ajudado a compreender os eventos críticos que ocorrem durante o desenvolvimento embrionário. Neste estudo, descrevemos a morfologia de dois embriões de ovinos e um feto utilizando técnicas macroscópicas e microscópicas. Obtivemos ovelhas sem raça definida com 24, 32 e 50 dias de gestação (estimado pelo método de Crown-Rump, CR). Os conceptos foram mensurados, pesados e caracterizados a olho nu. Macroscopicamente, observamos o desenvolvimento dos embriões E1 (24 dias), apresentando globo ocular sem pigmentação de retina e broto do membro torácico e pélvico. Já o E2 (32 dias), apresentava globo ocular com pigmentação na retina e os membros torácicos e pélvicos mais desenvolvidos. O F1 apresentou olhos cobertos com uma membrana e membros torácicos e pélvicos mais desenvolvidos. Enquanto isso, microscopicamente observamos no E1 somitos, ventrículo, átrio e cavidade oral ainda em desenvolvimento. Porém, no F1 já era possível observar ossificação da coluna espinhal, coração com estruturas mais complexas, como ventrículo, átrio, septo interventricular e saco pericárdio. Além disso, na cavidade oral observamos a formação da língua. Este trabalho fornece informações precisas e detalhadas sobre as características morfológicas dos principais órgãos dos sistemas (nervoso, circulatório, respiratório, digestivo e urinário) em cada fase embrionária e fetal analisadas.(AU)

Mesenchymal stem cells: emphasis in adipose tissue

The study of stem cells has evolved rapidly in recent decades. The importance is given to the concept that these cells are potentially able to become any cell type and have the power of self-renewal throughout the life of the organism. Mesenchymal stem cells (MSCs) can be isolated from various organs of the body such as bone marrow, adipose tissue, synovium, muscle and dermis, deciduous teeth, umbilical cord, placenta, liver, spleen and thymus. After their isolation in vitro, mesenchymal stem cells have the capacity to differentiate into various mesenchymal lineages and various tissues after the use of appropriate cultures. Studies have reported that mesenchymal stem cells from adipose tissue have the potential to differentiate themselves, like the cells commonly studied bone marrow. Adipose tissue is attractive due to its easy access, rapid expansion in vitro and only one collects the large amount of tissue. This review intends to show the protocols for isolation, cell culture and means of commercial cellular differentiation most widely used with emphasis on adipose tissue.

Efeito de mutações sítio-dirigidas nas hélices I, V e VI sobre a maturação, dimerização e interação com o agonista do receptor AT1 de angiotensina II / Effect of site-directed mutations in helices I, V and VI on the maturation, dimerization and interaction with agonist of angiotensin II AT1 receptor

Objetivos: Analisar a participação de resíduos aromáticos e alifáticos específicos encontrados na face mais externa das hélices I, V e VI do receptor AT1 na maturação, tráfego, formação do complexo agonista/receptor e dimerização. Métodos: Construção do vetor contendo o receptor A T 1 alinhado com a proteína fluorescente verde (EGFP) e realização de mutações pontuais nos resíduos V29 e 137 da hélice I, L195, L197, 1201, L202, L205 e F2o6 da hélice V e 1258, F259, F261, L262, L265 e 1266 da hélice VI para ácido glutâmico e alanina. Células HEK293 transfectadas com estas construções de forma transiente ou estável foram utilizadas para a realização dos experimentos de microscopia de fluorescência, ligação e afinidade à Ang II, BRET, análise do trafego subcelular, dimerização do receptor e experimentos funcionais através de ensaio de gene repórter. Resultados: O estudo da distribuição subcelular do receptor AT1 mostrou que o receptor selvagem encontra-se na membrana e que a substituição de resíduos para alanina, em todos os casos, não afetou sua localização, exceto no mutante L205A que foi encontrado no núcleo. Por outro lado, as mutações para ácido glutâmico, na maioria das vezes, afetaram o tráfego do receptor. Embora muitos dos mutantes da hélice V contendo ácido glutâmico tenham sido encontrados na membrana, todos os da hélice VI ficaram retidos no retículo endoplasmático. Da mesma forma, a afinidade pela Ang II nos mutantes para alanina não foi afetada, enquanto que as mutações para resultaram em diminuição da afinidade. A homodimerização do receptor A T 1 selvagem foi observada, sendo que a mutação dos resíduos em questão, que acarreta efeitos diversos não interferiu com a dimerização na maioria dos casos, como observado nos experimentos de BRET. Ensaios com o gene repórter para luciferase confirmaram a funcionalidade de alguns dos receptores mutantes do AT1 estudados aqui. É interessante que alguns mutantes para ácido glutâmico tiveram aumento na atividade da luciferase mesmo não sendo expressos na membrana plasmática como é o caso do mutante L 197E. Conclusões: Os resíduos alifáticos e aromáticos da hélice V do receptor AT1 são responsáveis por manter a configuração do sítio de ligação para Ang II. Além disso, os resultados do presente trabalho permitem sugerir que a face externa da hélice VI seja necessária para o correto dobramento do receptor AT1. Finalmente, nossos dados corroboram evidências anteriores que o receptor AT1 seja um homodímero.